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大鼠5-α還原酶(5AR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
0.5pg/ml-35pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中腸炎沙門氏菌抗體(SE-Ab)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中5-α還原酶(5AR)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗抗原，往包被單抗的微孔中依次加入5-α還原酶(5AR)，再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-α還原酶(5AR)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠5-α還原酶(5AR)濃度。
大鼠5-α還原酶(5AR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒試劑盒組成
130 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7終止液6ml×1 瓶2酶標試劑6ml×1 瓶
8標準品(64pg/ml)
0.5ml×1 瓶3
酶標包被板12 孔×8 條
9標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4樣品稀釋液
6ml×1 瓶10
說明書1 份
5顯色劑 A 液
6ml×1 瓶11封板膜2 張
6顯色劑 B 液
6ml×1/瓶12
密封袋1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
32pg/ml5 號標準品
150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
16pg/ml4 號標準品
150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
8pg/ml3 號標準品
150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
4pg/ml2 號標準品
150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2pg/ml1 號標準品
150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
雞腸炎沙門氏菌抗體(SE-Ab)酶聯(lián)免疫試劑盒操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值
大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定，計
算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6 個月
